Электрофорез днк в агарозном геле  Электрофорез днк в агарозном геле

Электрофорез днк в агарозном геле является наиболее эффективным способом разделения фрагментов ДНК различного размера в диапазоне от 100 п.н. до 25 кб. Агарозный гель выделяют из водорослей родов Gelidium и Gracilaria, и он состоит из повторяющихся agarobiose (L- и D-галактозы) субъединиц. Во время гелеобразования, агарозные полимеры образуют нековалентную связь и образуют сеть расслоений, размеры которых определяют свойства молекулярного просеивания геля.

Использование электрофореза в агарозном геле совершило революцию в отделении ДНК. До принятия агарозного геля ДНК разделяли с использованием центрифугирования сахарозы в градиенте плотности, которая только условно позволяла приблизиться к нужным результатам.

Для отделения ДНК с использованием электрофореза в агарозном геле, ДНК загружается в сборные скважины в геле и подачей тока. Фосфат основой ДНК (РНК) и молекулы имеет отрицательный заряд, поэтому при помещении в электрическое поле, фрагменты ДНК, будут мигрировать в положительно заряженный анод. Поскольку ДНК имеет равномерное соотношение масса/заряд, молекулы ДНК разделены по размеру в агарозном геле в виде рисунка таким образом, что расстояние обратно пропорционально логарифму его молекулярной массы.

Скорость миграции из молекулы ДНК через гель определяется следующим: 1) размерами молекулы ДНК; 2) концентрацией агарозы; 3) конформацией ДНК; 4) напряжением; 5) наличием бромида этидия; 6) типом агарозы и 7) буфером для электрофореза. После разделения молекулы ДНК могут быть визуализированы в УФ-свете после окрашивания с соответствующим красителем.

ЭПИТЕК биотехнология электрофорез h264